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세포 수 계산을 하는 이유
세포배양을 하게 되면 필수적으로 알아야 하는 세포수 계산! cell counting에 대해 알아보겠습니다.
이에 필요한 기구는 바로 hemocytometer입니다. 세포 수를 계산하기 위해 사용하며 이는 세포를 얼마나 배양할 것인지 알아볼 수 있게 해주죠. 35mm dish, T25 flask등 세포를 배양하는 dish에 적절한 양의 세포를 넣은 후, 배양기에 배양해야 세포가 잘 자랄 수 있어요. 만약 너무 많은 세포를 dish에 넣게 된다면 세포가 제대로 자라지 못하고 죽어버리게 되고, 또 너무 작게 넣으면 배양시간이 오래걸리게 되어 실험이 지체되곤하죠. 그래서 세포의 성장속도에 따라 또는 실험의 시간에 따라 세포를 적절하게 깔아주어야 해요.
이렇게 중요한 세포 배양! 그 첫번째 관문은 hemocytometer를 이용한 세포 수 계산입니다.
Hemocytometer 사용전 세포 전처리방법
- 세포를 배양한 배지를 피펫을 이용해서 제거해줍니다.
- Trypsin을 dish에 분주하여 부착되있는 세포를 떼어내준다. 너무 오랜시간 trypsin처리를 하면 세포에 나쁜 영향을 미치기때문에 세포가 떨어질 정도까지만 Trypsin 처리를 해줍니다.
- 저는 1분정도 놔둔 후 가볍게 dish를 쳐서 세포를 떼어내줘요. 물리적으로 세포를 떼어내주는게 세포에 좋지 않다고는 하지만 빠르게 떼어내 실험을 진행하는게 더 좋다고 생각해요. 사람마다 실험실마다 생각하는게 다르니 참고해주세요!
- 동량의 FBS가 첨가된 배지를 dish에 넣어주어 trypsin의 활성을 없애줍니다.
- 피펫팅을 하여 나머지 부착되어있던 세포를 떼어내주고 E-tube에 넣어줍니다.
- 그후, 원심분리하여 세포를 가라앉혀줍니다. trypsin이 든 배지를 피펫을 이용하여 제거한 후, 새 배지를 1ml 분주하여 세포가 뭉쳐진 상태를 풀어줍니다.
- 세포의 양에 따라서 넣어주는 배지의 양을 조절해주세요! 보통 15ml tube 또는 50ml tube에 새 배지를 넣고 원심분리때문에 뭉쳐져있는 세포를 one cell로 풀어줘요.
주의사항
세포를 one cell로 풀어주지 않으면 hemocytometer를 이용해 세포의 수를 셀때 정확하지 않을 수 있으니 충분히 풀어주는 게 좋아요. 배지의 양을 많이 넣은 경우에는 피펫에이드로 세포를 풀어주면 되며(15ml, 50ml tube), 세포를 빨아당기고 벽면으로 내보내면서 세포가 뭉친게 풀어지게 만들어주어야 해요. 이때 거품이 생기지 않도록 주의하면서 너무 세지 않은 강도로 세포를 다뤄주시면 돼요.
세포수를 세기 전 배양중인 세포를 어떻게 전처리 하는지에 대해 알아봤어요 다음 포스팅은 hemocytometer 사용방법, 세포 수 계산법과 주의사항에 대해 알아보는 걸로 할게요!
다음 포스팅에서 만나욧!
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