[실험 정보] 배지만들기, 배지의 종류와 미생물 배양

안녕하세요~ 오늘은 과학자라면 뗄래야 뗄 수 없는 배지만들기에 대해 알아볼게요

세균, 곰팡이등 식품의 안전성 검사와 오염여부등을 확인할 수 있고 검체에 대한 세균성 감염여부도 확인 할 수 있어요. 이렇게 많은 부분에서 사용되는 배지에 대해 알고 있으면 실험의 목적에 따라 배지를 선택하여 사용할 수 있게 된답니다. 꼭 이해하고 있어야 하는 부분이에요. 

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배지의 종류

배지의 종류는 엄청~ 다양하답니다. 고체배지, 액체배지, 평판배지, 사면배지등이 있어요.

고체배지: 말그대로 고체형태의 배지로 agar를 첨가하여 배지가 굳게 만들어주는 배지입니다. dish에 고체배지를 부으면 굳게 되고 이 배지위에 검체를 도말하여 배양한 다음 균배양 여부를 판단해요. 예를 들어 항생제 감수성 또는 균의 분리배양에 사용됩니다. 

액체배지: 액체배지의 경우도 액체로 된 배지인 걸 알수있죠. 고체배지보다 표면적이 넓기 때문에 특정 균의 배양이 촉진되요. 그 후, 동결건조 또는 stock으로 저장한답니다. 

사면배지: 호기성미생물의 증식을 확인하곤하며 집락형성을 관찰하기도 하는 사면배지는 45도로 기울여 시험관에서 굳힌 배지에요.

그외에도 많은 배지들이 존재해요. 가장 대표적인 몇가지만 얘기 드렸어요!

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배지 종류(좀더 자세하게)

배양용 배지의 가장 대표적인 배지는 LB 배지에요. 거의 대부분의 미생물이 자랄 수 있는 배지랍니다. 

배지를 제작하기 위해서는 미생물이 잘 자랄 수 있는 영양요소를 넣어주어야겠죠?

trypton, yeast extract, NaCl, agar이 들어가요. 이렇게 하나하나 개별로 넣어주기도 하지만 요새는 세상이 참 좋아졌기때문에!! 적정 양만 딱 넣어주고 증류수로 양을 맞춰 멸균만 시켜주면 되는 배지들이 많아요

그외에도 여러 배지가 있답니다. 기억나는 것만 일단 적어볼게요! 

Sodium Brain Heart Infusion Agar(BHIA)

이 배지는 장내 세균의 활성 또는 독성등을 유지하기 위한 용도로 사용되는 배지에요. 수산쪽에서도 많이 사용하고 저도 이 배지를 거의 LB배지보다 더 자주 사용했답니다 그만큼 고영양 배지에요.

Thiosulfate Citrate Bile Sucrose Agar(TCBSA)

이배지는 비브리오(Vibrio) 선택배지에요. 가압멸균을 하면 안되는 배지로 초록색을 띈답니다.

Salmonella Shigella(SS)

이 배지도 멸균 금지의 배지라서 미리 병을 멸균한 다음 배지를 만들어줘야해요. 에드워드 병또는 Salmonella shigella를 분리하기 위한 선택배지로 빨간색을 띕니다.

Todd Hewith agar(THA)

이 배지는 Strepto 선택배지에요.

Mueller Hinton Broth(MH)

MH배지는 항생제 테스트용으로 많이 사용되는 배지에요.

 

그렇다면 좀 더 자세한 배지 제작 방법에 대해 알아볼게요

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배지제작 과정

1. 배지(적정량) 배지뒷면에 1L당 넣어야 할 g이 적혀있어요. 만들고자 하는 양에 따라 배지의 g을 맞춰서 계량해주세요
2. 계량 후 증류수를 넣고 잘 섞어준 후 2-3분간 완전히 배지를 녹여줍니다. * Hot plate에서 마그네틱 자석을 플라스크에 넣어준 후 배지를 자석을 이용하여 용액을 회전시키면서 plate의 열로 배지를 완전히 녹이기도 하지만 보통 그냥 증류수에 넣고 흔들어주면 다 녹습니다.
3. 121도, 15분 가압 멸균을 진행하여 줍니다.
4. 온도가 4-50도 정도 될때 까지 식혀줍니다.
5. 클린벤치에서 페트리디쉬의 라벨을 해주고 식은 배지를 패트리디쉬에 분주합니다. 약 15-20ml정도 넣는다고 생각하면 됩니다.
6. 클린벤치를 켜 둔 상태로 배지를 건조시켜줍니다. 물기제거 필수입니다.
7. 그 후 냉장 보관하고 사용해야 할때 꺼내서 실험을 진행합니다. * 보관할때는 뚜껑이 밑으로 가게 뒤집어서 보관해야해요. 물기가 생기는 경우 만약 뚜껑이 위로 가있는 상태로 보관했다면 그 물기가 바로 배지로 떨어져 오염이 될 수 있기때문에 그것을 방지하기 위함이죠. 

단, SS나 TCBS의 경우에는 가압멸균하면 안되는거 기억하기!

 

배지에 대해서 간단하게 알아봤는데 어떠신가요? 엄청 종류가 많고 배지를 제작하는 방법과 조성또한 다 다를 수 있지만 오늘은 가장 기본적인 정보에 대해 알아봤어요. 다들 도움이 되셨길 바라면서 그럼 이만!