[실험 정보] API Test(20E, 20NE), 그람음성균에 대한 생화학적 시험

안녕하세요 오늘은 생화학적실험의 가장 기본적인 API Test에 대해 알아볼게요.

다양한 균에 대한 API 실험이 있지만 모두 실험방법이 비슷하기때문에 오늘은 제일 기본적인 API 20NE에 대해 해 적어보겠습니다. 장내세균이외의 그밖에 그람음성 균을 신속하게 동정할 수 있고 무엇보다 하나의 colony를 이용해서 23가지의 생화학적 시험을 수행할 수 있어요. 하지만 눈으로 시험 결과를 판단해야하는 점으로 사람마다 기준이 달라 신뢰도 면에서 조금 떨어지는 단점이 있답니다. 그렇기때문에 실험자가 바뀌는건 좋지 않고 실험자만의 기준을 세워서 시험을 진행하는 것이 가장 좋습니다. 

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생화학적 특성을 판단할 수 있도록 작은 시험관 형태로 나오는 API TEST! 시험을 다 하고 보면 알록달록 이쁘긴하더라구요 ㅎㅎ

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시약 및 기구

• 배양판과 배양뚜껑(API TEST)
• API 20NE 스트립과 시약
• 멸균 식염수, 피펫, 팁
• Mineral oil
• 순수분리 배양된 세균

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시험방법

20NE의 경우

1. 먼저 순수분리된 세균을 준비해줍니다.
2. 옥시데이즈 test를 실시해줘요. 이 시험은 슬라이드글라스에 물을 한방울 떨어트리고 균을 따서 문질러 준 후 OX시약을 그 위에 떨어트려 색을 보는 시험으로 1-2번내로 진한 청색이 되면 양성반응으로 검사지에 CHECK하면 됩니다.
3. 멸균생리식염수 또는 NaCl 0.85% medium 2ml에 세균을 부유시켜 0.5 MacFarland가 되도록 만들어줘요
4. 균액을 NO3부터 PNPG까지 well을 반쯤 채워줘요
5. AUX 미디움을 개봉해서 남은 균액을 200ul넣어준 후 피펫으로 기포가 생기지 않도록 균질화를 시켜줘요
6. 균질화 시킨 AUX 미디움을 이용해서 GLU에서 PAC까지 웰을 전체 다 채워줘요.
7. GLU, ADH, URE Well은 광유로 전체를 다 채워줍니다. 이렇게 되면 혐기조건이 완성되요!
8. 트레이의 뚜껑을 덮은 후 30도에서 24시간 배양을 합니다.

20E의 경우

1. 균준비과정은 같고 CIT, VP, GEL시험관은 Well 전체를 채우고, ADH, LDC, ODC, URE, H2S는 균액을 절반 채운 후 Mineral oil을 채워줍니다.
2. 그후 25도 18-24시간 배양 후 판독하면 되요.
3. 시약 첨가없이 시험 결과를 먼저 기록하고 GLU시험관이 음성(청색, 녹색)이거나 양성반응이 2개 이하일 경우에 시약을 넣지 않고 48시간까지 배양해줍니다.

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판독

20NE의 경우

1. 배양이 끝난 후, 판독표를 이용해서 판독해줘요(GLU, ADH, URE, ESC, GEL, PNPG)
2. NO3의 경우에는 NIT1,2시약을 NO3 Well에 한방울 씩 떨어트리고 5분뒤 빨간색이면 양성이에요!
3. 혹시 무색일 경우 2-3mg의 아연 분말을 well에 가해서 5분후 무색이면 그대로 양성, 빨간색으로 변하면 음성으로 판독합니다.
4. TRP의 경우에는 JAMES 시약을 한방울 떨어트렸을때 곧바로 핑크색으로 변하면 양성이에요

20E의 경우

1. GLU가 양성(노랑)이거나 양성반응이 3개 이상이면 TDA, VP, IND에 시약을 넣어서 결과를 관찰해주면 됩니다.

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결과 해석

결과지에는 시험 종목이 3개씩 묶여서 작성되있고 각 그룹마다 차례로 숫자가 적혀있어요. 각 그룹의 반응에서 양성결과에 대응하는 숫자를 더해 스트립상의 20개 검사와 옥시다아제 검사에 대해 7자리의 숫자가 나오게 됩니다.

이에 상응하는 미생물을 찾을 수도 있고 동정 프로그램을 사용하는 경우에는 7자리 숫자 결과를 입력해요.

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주의사항

다 아는 내용이지만 간단하게 적어볼게용. 

검사에 사용된 모든 시험기구들은 모두 멸균하여 소각해야 합니다.

체외진단용외에는 사용 금지하고 시약들의 유효기간을 정확히 지켜주어야 정확한 결과를 얻을 수 있어요 

 

이상 API TEST 실험 과정 정리였습니다~