[실험 정보] 실험 기초 정복 Serial dilution

Serial dilution 정의
Serial dilution이 필요한 이유
Serial dilution 예시 및 방법

Serial dilution 정의

실험의 기초라고 할수있는 Serial dilution에 대해 알아볼게요. 연속희석법이라고도 하는 이 방법은 용액내에 내가 원하는 시료가 얼마나 들어있는지 결정하기 위해 생물, 화학 등과 같은 과학응용분야에서 많이 사용되어지고 있어요. serial dilution을 통해 관심물질의 농도를 결정하거나 추가 테스트를 위한 샘플들을 준비하는데도 사용해요. 앞선 실험 정보들에서 realtime PCR의 경우에도 절대정량의 경우 표준곡선을 구해야 하고 이 곡선을 구하기 위해 serial dilution을 진행한답니다.

 

Serial dilution이 필요한 이유

주된 이유는 알려진 농도 범위의 용액을 얻기 위해 물질의 농도를 단계적으로 줄이는 것이에요. 더 낮고 관리하기 쉬운 농도 용액을 준비할 수 있기 때문에 원하는 관심 물질 시료의 농도가 높을때 특히 유용하게 다룰 수 있어요. 예시 중 하나로 박테리아나 기타 미생물의 농도를 결정할때 샘플을 여러번 희석한 후 플레이트에 배양하여 나타나는 콜로니의 수를 통해 해당 용액에 얼마나 많은 미생물이 존재하는지 확인할 수 있어요. 농도가 너무 높은 샘플의 경우 콜로니가 너무 많이 나타나 제대로된 농도를 계산할 수 없기때문에 serial dilution을 통해 희석한 샘플을 이용하여 실험을 진행하게 됩니다. 

 

두번째 이유는 용액을 단계별로 희석하여 보고자 하는 샘플의 농도가 검출범위 내에 있는지 확인 할 수 있다는 점에서 필요한 방법이죠. 일련의 희석을 사용하여 다양한 분석에 대한 보정 곡선을 만들수 있어 분석 중인 물질의 정확한 정량화가 가능해요! 앞에서 말했던 realtime PCR이 바로 그 예인거죠.

 

여기서 TIP!
Serial dilution을 할때 vortex를 충분히 하지 않으면 정확한 농도의 희석이 이루어지지 않아요
저는 꼭 tube 뚜껑을 닫고 vortex를 충분히 한 후, 피펫으로 희석을 진행해요. 간혹 피펫으로 몇번 섞은 후 희석을 하는 경우가 있는데 표준곡선을 만들거나 할때 다시 해야하는 불상사가 생길 수 있어요 조심!

Serial dilution 예시 및 방법

예를 들어 10배 연속 희석에 대해 알아볼게요.

1. 용액 1ml을 취해서 증류수 또는 완충용액 9ml에 첨가하여 1:10 희석을 만듭니다. 

2. 그런다음 이 용액을 완전히 혼합해서 1:10희석액 1ml을 증류수 또는 완충용액 9ml에 넣어 1:100 희석액을 만듭니다.

이 과정을 원하는 희석액이 될 때 까지 반복해주시면 됩니다. 

개념이 어느정도 잡혔다면 응용하시면 돼요!

1:10희석에서 1은 희석하고자 하는 용액의 양이고 10은 최종 양이라고 생각하시면 편하실 거에요.

 

Serial dilution 연속희석법

다른 예를 한번 들어볼까요?

1:20 희석을 한다고 하면 위의 방법대로 동일하게 진행하면 됩니다.

1. 용액을 1ml, 증류수 또는 완충용액을 19ml 첨가하여 1:20희석을 만듭니다. 그 후, 한번더 serial dilution을 진행해주시면 1:20 x 1:20 이기때문에 희석 후 농도는 1:400 희석액이 되는 것이죠.

 

이렇게 Serial dilution이 필요할때 상황에 맞게 희석을 하시면 됩니다.

많은 도움이 되셨길 바래요!